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“两虫”检测知多少?

发布日期:2023-03-10      浏览次数:469

1.什么是两虫?

贾第鞭毛虫和隐孢子虫是一类寄生于人体和动物体内的肠道致病性寄生虫。

2.感染两虫的危害

贾第鞭毛虫孢囊和隐孢子虫卵囊属于病原微生物的休眠体,能够抵御外界不良环境,并且能够耐受常规水处理中的氯消毒,因此在水环境中具有较长的存活时间和潜伏期。

贾第鞭毛虫和隐孢子虫引起的消化道感染在世界范围内普遍存在。人或动物通经水源性或食源性感染“两虫"后,主要症状为腹痛、腹泻、腹胀、呕吐、发热和厌食等,典型病人表现为以腹泻为主的吸收不良综合征,腹泻呈水样粪便,量大、恶息、无脓血。儿童患者可由于腹泻,引起贫血等营养不良,导致生长滞缓。对于患有 AIDS 等免疫功能缺陷者,临床表现为持续性难以控制的腹泻,若不及时对症治疗,将有70%的患者将因此脱水而死。

3.检验方法

2006年,我国将“两虫"指标纳入国家饮用水检测指标,国标中两虫检验方法为免疫磁分离荧光抗体法,2022年我国发布了饮用水新国标GB 5749-2022,代替了06年的饮用水检测标准,新标准中针对两虫检测新增了检验方法-滤膜浓缩/密度梯度分离荧光抗体法。

基于标准限值要求,目前水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫的检测方法主要分为三个步骤:浓缩富集、分离纯化和染色镜检。其中,浓缩富集和分离纯化是影响检测方法成本和回收率的关键步骤。

3.1免疫磁分离荧光抗体法

免疫磁分离荧光抗体法源自EPA 1623,检测设备和试剂耗材依赖进口。

它的浓缩方法为滤囊/滤芯过滤法,可以用较高的流速处理大量水样,但由于孢囊/卵囊的黏附作用而导致部分孢囊/卵囊难以洗脱,并且滤囊/滤芯约 2500~3000 元/样,检测成本高昂。免疫磁分离法根据特异性的抗原抗体反应具有较好的纯化效果,该方法中使用的磁珠约 500 元/样,成本相对较高。

3.2滤膜浓缩/密度梯度分离荧光抗体法

滤膜浓缩/密度梯度分离荧光抗体法针对高浊度水采用沉淀离心和低浊度水采用膜过滤溶解纯化的方法,实现替代被美国垄断的囊过滤的纯化方法,打破美国的专利布局垄断,拥有完整的两虫检测新方法,检测成本仅为美国EPA 1623方法的20%;

该方法在2011-2015年完成全国供水行业内部测试,2018年被纳入住建部行业标准《城镇供水水质标准检验方法》CJ/T 141-2018;2018-2019年顺利完成卫健委组织国家标准《生活饮用水标准检验方法》GB/T 5750修订所必须的全国验证,已被纳入新版国标检测方法。

絮凝沉淀法对于孢囊/卵囊的浓缩具有很好的效果,针对浊度大于等于 20 NTU 的水样采用此浓缩方法。滤膜溶解法是一种对于孢囊/卵囊具有较高回收率的浓缩方法,不仅能有效降低膜上附着物质在转移过程中的损失,并且可以解决滤囊/滤芯过滤法成本较高和孢囊/卵囊难以洗脱的问题,针对浊度小于20 NTU 的水样即采用此法。

密度梯度离心法是将 Percoll 与蔗糖混合作为密度梯度离心介质,使用后在确保较好回收率的同时降低了试剂成本。

4.总结

2022新标准中采用的滤膜浓缩/密度梯度分离荧光抗体法,该方法在保障 GB/T 5750-2006 方法回收率的基础上,降低设备投入 75%,降低耗材成本 85%,使隐孢子虫检测成本从 3000 元/样品降低到 300 元/样品。

综合我国现有检测方法,滤膜浓缩/密度梯度分离荧光抗体法具有稳定可靠、成本低廉、检测灵敏的优点,对于生活饮用水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫检测标准方法的建立具有参考价值。

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